sábado, 20 de febrero de 2016

BACTERIAS-16/17-cultivos bacterianos, tinción


CULTIVOS BACTERIANOS

 Para poder estudiar las bacterias hay que preparar un cultivo. Estos cultivos requieren un medio de crecimiento acorde con las necesidades metábolicas de la especie (aerobias, anaerobias, fototrofas, quimiotrofas, medios líquidos, sólidos, etc).

En el caso de cultivos en medio sólido pueden realizarse en placas de cultivo, placas de Petri. En ellas se prepara un medio gelatinoso (normalmente agar) enriquecido con los nutrientes necesarios. Posteriormente se realiza una “siembra”, se toman muestras con un “asa de siembra” esterilizada y se extiende sobre el medio de cultivo, con cuidado para que no se contamine con otras bacterias, como las ambientales.

El crecimiento bacteriano muestra una serie de etapas o fases:

- fase de latencia- apenas se observa crecimiento celular. Las bacterias se están adaptando al ambiente (nutrientes, temperatura, pH, etc).
- fase exponencial- una vez adaptadas al medio comienza un rápido crecimiento, para colonizar todo el medio.
- fase estacionaria- a medida que ha aumentado el número de bacterias (y de colonias),  los nutrientes comienzan a escasear y los productos tóxicos liberados por el metabolismo bacteriano se acumulan, las bacterias compiten entre ellas. Todo esto conlleva un crecimiento lento/o nulo de las bacterias.
-  fase de declinación-  comienza la muerte celular por falta de nutrientes y exceso de tóxicos.



Sobre estos tipos de cultivos se pueden realizar todo tipo de estudios. Uno de ellos es el estudio de antibiogramas. Sobre un cultivo bacteriano se sitúan discos impregnados en distintos antibacterianos, que de acuerdo con su idoneidad con respecto a la especie bacteriana generarán, alrededor del disco, una zona donde las bacterias mueren: halo de inhibición. Cuanto mayor sea este halo más eficaz es el fármaco.







Una forma de identificar bacterias es a través de la Tinción de Gram. Esta técnica fue establecida por Christian Gram (1884) y se basa en la distinta estructura de la pared bacteriana.

- La muestra se fija a un porta (con calor).
- Se añade el primer colorante (cristal violeta, o violeta de genciana), se deja actuar unos minutos, se lava para eliminar el exceso, se deja secar
- Se añade un mordiente (ejem. Lugol, para incrementar la fijación del colorante).
- Posteriormente se añade un disolvente orgánico (alcohol o acetona),  que destiñe en el caso de las Gram – (es decir, arrastra el violeta de genciana que se había quedado en la bicapa externa de la pared bacteriana).
-  Se añade un segundo colorante (safranina), se deja un par de minutos y se lava el exceso. En el caso de las Gram +  no hace ningún efecto, de modo que esas bacterias se observan de color violeta, en el caso de las Gram-  adquieren tonalidad rosada.


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